请教:RT
请教:RT-PR的方法与ELISE、放射免疫法相比有何优劣?
RT-PR法:首先将细胞因子产生细胞的RNA提取出来,再经逆转录合成cDNA,以cDNA为模板,在细胞因子引物的引导下,进行PCR扩增。 这种技术是迄今最敏感的细胞因子检测技术,而且可以直观的反应淋巴细胞产生细胞因子的能力。 缺点是操作较为繁琐,测定结果只能代表细胞因子基因的表达,而不能代表活性细胞因子的水平,并且不容易对细胞因子表达水平进行定量。 ELISA法:大多使用夹心法检测。要有抗同一细胞因子不同表位的两个抗体, 一个抗体用于包被作捕捉抗体用;另一个抗体分子作检测用,其分子上标记生物素,使生物素分子与酶标记的亲和素分子结合,一般用单抗体包被抗体,用多抗或几个单抗混合起来作检测抗体,这样可以提高检测的灵敏度。 ELISA法的优点是特异、方便、易标准化和批量化,很适合临床应用。 其缺点是所提生供的是免疫活性信息而不是细胞因子生物活性信息,除此之外,血清与体液中的嗜异性抗体,抗类风湿因子等自身抗体也可干扰测定结果,而且不能反应细胞内的细胞因子水平。 放射免疫法与夹心ELISA法基本相同,而且夹心ELISA法由于生物素和酶标亲和素的级联放大,其灵敏程度达到了放免的水平。