求助高手!转化后菌液生长速度忙是什么原因?我现在在做原核表达方面
我现在在做原核表达方面的实验,光连接快做了一个月了,总是连不上,郁闷!我用的载体是p28c,目的片段是连在T载体上的,两者同时用EcoRⅠ和HindⅢ同时双酶切后胶回收,酶切片段检测都正确,连接后用蓝白斑筛选都正常,就是在挑取单菌落后,摇菌,菌液后期生长慢,这次甚至还在试管底部出现了些白色沉淀,我百思不得期解,请教各位高手是什么原因?
有可能是你要表达的基因产物对宿主菌有抑制作用,换个宿主菌株或换个表达载体试试。试管中有白色沉淀说明死菌存在,另外不加抗生素尝试一下,待菌生长旺盛后加入抗生素。